欢迎来到南京卡米洛生物工程有限公司网站!
技术文章
首页 >>> 技术文章 >>> 单克隆抗体的使用有着必须遵从什么方法

单克隆抗体的使用有着必须遵从什么方法

更新时间:2019-01-27   点击次数:1059次
  单克隆抗体技术的基本原理:要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞,但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨髓瘤细胞可在体外生长繁殖,应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一,得到骨髓瘤细胞。这种细胞继承两种亲代细胞的特性,单克隆抗体既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性,用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群,可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体
 
  单克隆抗体即把产生抗体的B淋巴细胞与多发性骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞。既有骨髓瘤细胞无限生长的能力,又有B淋巴细胞产生抗体的功能。能在细胞培养中产生大量单一类型的高纯度抗体。单克隆抗体技术的应用,是免疫学中的一次革命,与常规的多克隆抗体,特异性更强,灵敏度更高,并且便于大规模重复生产,*性非常明显。目前已广泛应用于科研、检测、医药等各个领域。即把产生抗体的B淋巴细胞与多发性骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞。既有骨髓瘤细胞无限生长的能力,又有B淋巴细胞产生抗体的功能。能在细胞培养中产生大量单一类型的高纯度抗体。单克隆抗体技术的应用,是免疫学中的一次革命,与常规的多克隆抗体,特异性更强,灵敏度更高,并且便于大规模重复生产,*性非常明显。目前已广泛应用于科研、检测、医药等各个领域。
 
  单克隆抗体的使用有着必须遵从的方法,这样才能达到理想的结果。
 
  1、首先将试剂盒恢复室温(大约30分),然后用纯水把清洗液配成工作浓度。
 
  2、取出酶标板。每个标本需要6孔,阳性对照6孔。多余的用自封袋保存,记得放入干燥剂。
 
  3、将细胞培养上清50μl加入酶标微孔板,每个标本加6孔,阳性对照也是加6孔每孔50μl。然后每孔再加入50μl标本稀释液。贴上封板膜37℃温育30分钟。
 
  4、弃去板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl,通用阳性对照的6孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
 
  5、吸弃板内液体,洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂A和显色剂B各50μl,换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。
 
  6、本试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果,看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。更可将反应终止液(每孔50μl)终止反应后用酶标仪450nm测定波长,630nm参考波长双波长测定结果,参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。阳性对照0D小于0.5实验无效,需要重做。

版权所有© 2018 南京卡米洛生物工程有限公司