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5-羟吲哚乙酸试剂盒使用前必要的准备工作
更新时间:2019-09-26 点击次数:941次
按5-羟吲哚乙酸试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。5-羟吲哚乙酸试剂盒中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
加样
在5-羟吲哚乙酸试剂盒中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其中加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。
保温
在5-羟吲哚乙酸试剂盒中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育,有人称之为孵育,在5-羟吲哚乙酸试剂盒中似不恰当。5-羟吲哚乙酸试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。
洗涤:
洗涤在5-羟吲哚乙酸试剂盒过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在5-羟吲哚乙酸试剂盒操作中,洗涤是主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种
5-羟吲哚乙酸试剂盒广泛应用在免疫学检验的各领域中,有着灵敏度高、特异性强、经济性较好等优点,下面我们来说说ELISA试剂盒的显色温育反应。
5-羟吲哚乙酸试剂盒约40分钟显色达,随即逐渐减弱,至2小时后即可*消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。
5-羟吲哚乙酸试剂盒实验中显色是5-羟吲哚乙酸试剂盒中的一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,5-羟吲哚乙酸试剂盒加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定的显色可在室温进行,时间一般不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔显色的情况适当缩短或,及时判断。